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【20230309期】特定蛋白方法学---散射＆透射？
2023-03-16
什么是特定蛋白？
特定蛋白：在人体血清中含有许多蛋白质,它们来源于组织细胞,是血清中含有的功能蛋白,执行着各种功能,很多疾病都可以引起血清蛋白质的变化，蛋白质具有良好的抗原性，利用蛋白质的抗原性，可以采用抗原-抗体反应对具有某一特定抗原性的蛋白质进行测定，故又称特定蛋白检测，可存在于血液、脑脊液、尿液等体液中。
02
特定蛋白检测基本原理
1、光学的理论发展：免疫比浊法是基于比色法的基础发展，由双价的抗体和单价的抗原间反应产生了免疫沉淀。
2、透射、散射区别：
透射比浊：检测由抗原抗体结合成抗原抗体复合物，产生的浊度随抗原量增加而增加，其透光率强度随之减弱，根据吸光度值计算待测抗原的量。
散射比浊：检测由抗原抗体结合产生成抗原抗体复合物颗粒，导致的光散射，散射光强度与单位时间内抗原抗体复合物的生成速率成正比。
03
特定蛋白检测标准化工作
❂ 1967:WHO 67/86成为首批免疫球蛋白校准品
❂ 1980:CAP研制血清蛋白参考物质（RPSP-1),随后又研制出RPSP-2/3/4
❂ 1993:IFCC研制CRM 470,一种通用的参考物质，包含了14种血清特定蛋白，后更名为ERM-DA470
❂ 2008:IFCC研制出最新的ERM-DA470K/IFCC
❂ 2010:IFCC为CRP制备液体冰冻参考物质ERM-DA472/IFCC,与ERM-DA470K/IFCC使用相同的清池
❂ 2010:IFCC研制胱抑素C参考物质ERM-DA471/IFCC
❂ 2011:IFCC为CRP研制出新的参考物质ERM-DA474/IFCC
04
特定蛋白抗原过剩情况
1、使反应信号低于分析测量范围上限对应的检测信号，结果出现假性低值
如下图，不同抗原浓度的两点具有相同的测量信号：
05
特定蛋白检测中钩状效应的影响
钩状效应即HOOK效应，是指由抗原抗体比例不合适而导致的假阴性的现象。
抗体过量叫做前带效应；
抗原过剩叫做后代效应。
在恒定抗体浓度下增加抗原浓度的免疫沉淀反应
免疫比浊法面对抗原过剩的问题，该如何解决？
3、如何处理抗原过剩
仪器反应线性参数的设置：通过对事件反应进程曲线的检测，计算反应不同时段的速率比值与预设的参数进行比较自动识别钩状效应的出现
反应近终点时再添加抗原
*文章图片来源网络，如侵权请联系删除。
特定蛋白：在人体血清中含有许多蛋白质,它们来源于组织细胞,是血清中含有的功能蛋白,执行着各种功能,很多疾病都可以引起血清蛋白质的变化，蛋白质具有良好的抗原性，利用蛋白质的抗原性，可以采用抗原-抗体反应对具有某一特定抗原性的蛋白质进行测定，故又称特定蛋白检测，可存在于血液、脑脊液、尿液等体液中。
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特定蛋白检测基本原理
1、光学的理论发展：免疫比浊法是基于比色法的基础发展，由双价的抗体和单价的抗原间反应产生了免疫沉淀。
2、透射、散射区别：
透射比浊：检测由抗原抗体结合成抗原抗体复合物，产生的浊度随抗原量增加而增加，其透光率强度随之减弱，根据吸光度值计算待测抗原的量。
散射比浊：检测由抗原抗体结合产生成抗原抗体复合物颗粒，导致的光散射，散射光强度与单位时间内抗原抗体复合物的生成速率成正比。
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特定蛋白检测标准化工作
❂ 1967:WHO 67/86成为首批免疫球蛋白校准品
❂ 1980:CAP研制血清蛋白参考物质（RPSP-1),随后又研制出RPSP-2/3/4
❂ 1993:IFCC研制CRM 470,一种通用的参考物质，包含了14种血清特定蛋白，后更名为ERM-DA470
❂ 2008:IFCC研制出最新的ERM-DA470K/IFCC
❂ 2010:IFCC为CRP制备液体冰冻参考物质ERM-DA472/IFCC,与ERM-DA470K/IFCC使用相同的清池
❂ 2010:IFCC研制胱抑素C参考物质ERM-DA471/IFCC
❂ 2011:IFCC为CRP研制出新的参考物质ERM-DA474/IFCC
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特定蛋白抗原过剩情况
1、使反应信号低于分析测量范围上限对应的检测信号，结果出现假性低值
如下图，不同抗原浓度的两点具有相同的测量信号：
05
特定蛋白检测中钩状效应的影响
钩状效应即HOOK效应，是指由抗原抗体比例不合适而导致的假阴性的现象。
抗体过量叫做前带效应；
抗原过剩叫做后代效应。
在恒定抗体浓度下增加抗原浓度的免疫沉淀反应
免疫比浊法面对抗原过剩的问题，该如何解决？
3、如何处理抗原过剩
仪器反应线性参数的设置：通过对事件反应进程曲线的检测，计算反应不同时段的速率比值与预设的参数进行比较自动识别钩状效应的出现
反应近终点时再添加抗原
*文章图片来源网络，如侵权请联系删除。